細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：

一、細(xì)胞復(fù)蘇

1.將10ml移液管、移液槍、1ml槍頭、50ml離心管、T25培養(yǎng)瓶、酒精燈、廢液缸等物品放入超凈工作臺(tái)，紫外燈照射30min后再通風(fēng)30min；

2.預(yù)熱培養(yǎng)基；

3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

4.將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出；

5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動(dòng)使其融化；

6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

7.吸取9ml培養(yǎng)基到50ml離心管中；

8.用1ml槍頭吸取解凍的細(xì)胞懸液于離心管中；

9.1000r/min,離心5min；

10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

11.吸棄上清液；

12.吸取1ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使細(xì)胞分布均勻，并做好標(biāo)記；

13.在顯微鏡下觀察復(fù)蘇的細(xì)胞密度及狀態(tài)；

14.將細(xì)胞放回二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

商品屬性：

DMEM/F12適于克隆密度的培養(yǎng)。F12培養(yǎng)基成分復(fù)雜，含有多種微量元素，和DMEM以1：1結(jié)合，稱為DMEM/F12培養(yǎng)基（DME/F12medium），作為開發(fā)無(wú)血清配方的基礎(chǔ)，以利用F12含有較豐富的成分和DMEM含有較高濃度的營(yíng)養(yǎng)成分為優(yōu)點(diǎn)。該培養(yǎng)基適用于血清含量較低條件下哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。為了增強(qiáng)該培養(yǎng)基的緩沖能力，改良之一是在DMEM/F12（1：1）中加入15mMHEPES緩沖液。

運(yùn)輸和保存

運(yùn)輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個(gè)月；?

注意事項(xiàng)：

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來(lái)水沖洗即可。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

?細(xì)胞復(fù)蘇?：

從液氮罐中取出凍存細(xì)胞，迅速放入37℃水浴中解凍。

解凍后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕輕搖動(dòng)使細(xì)胞均勻分布。

放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞換液?：

吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)的舊培養(yǎng)液。

加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細(xì)胞，以去除懸浮在細(xì)胞表面的碎片，重復(fù)幾次。

加入新的培養(yǎng)基。

?細(xì)胞傳代?：

當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)到80%~90%時(shí)，進(jìn)行傳代。

吸除或倒掉瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加入PBS緩沖液漂洗。

加入消化液，輕輕搖動(dòng)使消化液流遍所有細(xì)胞表面。

將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘，觀察細(xì)胞變化。當(dāng)細(xì)胞間隙增大后，加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化。

吹打細(xì)胞使其成為懸液，轉(zhuǎn)移到離心管中離心。

棄上清，加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基。

做好標(biāo)記，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞凍存?：

選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行凍存。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到離心管中離心，棄上清。

加入適量的凍存液（如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細(xì)胞。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中，標(biāo)記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時(shí)后或過夜轉(zhuǎn)至液氮罐保存。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠可溶性壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(sAIL)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat macrophage colony stimulating factor (M-CSF) ELISA Kit 大鼠巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)試劑盒

HumanMethemoglobin,MHBELISAKit 人高鐵血紅蛋白(MHB)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanadrenomedullin,ADM試劑盒人腎上腺髓質(zhì)素(ADM)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物NADPH氧化酶活性比色法定量試劑盒20次(10樣本)

MouseactivatedproteinC,APCELISAKit小鼠活化蛋白C(APC)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠原激活蛋白激酶10(MAPK10)試劑盒 ，英文名： MAPK10 ELISA Kit

Mouse omein ELISA Kit (omein) 小鼠網(wǎng)膜素(omein)試劑盒

Ratesogen,EELISAKit 大鼠雌激素(E)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHGV-IgM(HumanHepatitisGvirusIgG)ELISAKit人庚型肝病毒IgM

細(xì)胞SGK1激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitPCⅠ大鼠Ⅰ型前膠原

磷酸化活化T細(xì)胞核因子1蛋白抗體

氧化蛋白質(zhì)水解酶

HA重組甲型流感 H7N3 (A/turkey/Italy/214845/2002) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

PAR-2 (Protease-activated receptors-2 0.5mgPAR-2 (Protease-activated receptors-2) 蛋白酶激活受體-2抗原

SUV420H2重組人 SUV420H2 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

CCL20 Protein Human 重組人 CCL20 / MIP-3屬

DMEM/F12 培養(yǎng)基Socs 3 (suppressor of cytokine signaling 3 0.5mgSocs 3 (suppressor of cytokine signaling 3) 細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)抑制蛋白3抗原

CPVL Protein Human 重組人 CPVL / Carboxypeptidase 蛋白

PPIL2重組人 PPIL2 蛋白 (aa 280-457, His 標(biāo)簽) Protein

PDGFC Protein Human 重組人 PDGF-C 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

B4GALT1重組人 B4GALT1 / GGTB2 蛋白 Protein