正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

商品屬性：

測定意義：

乙醛脫氫酶 (EC 1.2.1.10)是醛脫氫酶的一種，廣泛存在于各種動物、植物和微生物體內。主要作用是將乙醛氧化成乙酸，在酒精代謝中起主要作用。在人類和許多動物體內，線粒體乙醛脫氫酶能把對生物體有害的醇類轉化，所以在細胞解毒研究中乙醛脫氫酶受到高度關注；同時，乙醛脫氫酶在分子生物學以及相關疾病的檢測方面有較廣泛的研究應用。

測定原理

在輔酶Ⅰ存在的條件下，乙醛脫氫酶催化乙醛和NAD+轉化為乙酸和NADH，在340nm處的吸光值會增加，測定340nm處的吸光值變化，可計算得到乙醛脫氫酶的活性。

自備實驗用品及儀器

天平、離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液一：液體 25mL×1 瓶，4℃保存。

提取液二：液體 25mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：粉劑×1 瓶，-20℃保存；

試劑二：液體 25mL×1 瓶，4℃保存；

試劑三：液體 14μL×1 支，4℃保存；

組織樣本的前處理：

①總 GAPDH 酶提取：建議稱取約 0.1g 樣本，加入 1mL 提取液一，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W，破碎 3s，間歇 7s，總時間 1min），然后 4℃，8000g 離心 10min，取上清測定。

②胞漿和葉綠體 GAPDH 酶的分離：按照植物組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5～10的比例（建議稱取約 0.1g 樣本，加入 1mL 提取液一），冰浴勻漿后于 4℃，200g 離心 5min，棄沉淀，取上清在4℃，8000g 離心 10min，取上清用于測定胞漿 GAPDH 酶活性，取沉淀加 1mL 提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W，破碎 3s，間歇 7s，總時間 1min），然后 4℃，8000g 離心 10min，取上清測定葉綠體中 GAPDH 酶活性。

建議測定總 GAPDH 酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測定胞漿和葉綠體中的GAPDH，則按照步驟②提取粗酶液。細菌或培養細胞的前處理先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

生化檢測試劑盒實驗操作說明：

一、抗氧化系列生化檢測試劑盒

包括氧化酶（XO）活性分析、超氧陰離子清除能力分析、葡萄糖氧化酶活性（GOD）檢測、總抗氧化能力（TAC）檢測、植物原花青素(OPC)含量檢測、植物類黃酮含量檢測、植物總酚（TP）含量檢測試劑盒。

氧化酶（XO）活性分析試劑盒為例，提供了一種簡單易用的比色分析法，用于測定各種樣品中的XO活性，特點是測定血清，血漿，組織/細胞裂解物和其他生物體液中的氧化酶活性，以及廣泛的檢測范圍：15.6 -500 mU/mL。

二、氧化系列生化檢測試劑盒

包括*酶 (CAT) 活性分析、*（H2O2）檢測、脂質過氧化(丙二醛) 分析、蛋白質羰基含量檢測、超氧陰離子含量檢測等試劑盒。

蛋白質羰基含量檢測試劑盒（比色法）為例，提供了一種簡單易用的比色法，用于分析不同生物樣品（細胞/組織裂解液，生物液體）中蛋白質羰基含量。在370 nm處有特征吸收峰。

特點是：1.測定組織樣本、細胞、細菌、血清等中的蛋白質羰基含量。2.樣本處理、實驗步驟以及結果計算更加詳盡準確精煉。3.保質期長。

三、抗逆系列生化檢測試劑盒

包括超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測、羥自由基清除能力分析、多酚氧化酶（PPO）活性檢測、過氧化物酶(POD)活性檢測等試劑盒。

超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測試劑盒為例，提供一種簡單易用的比色測定法，用于定量測定血清，血漿，組織/細胞裂解液和其它生物體液中的SOD酶活性。

特點是：1.測定血清，血漿，組織/細胞裂解物和其他生物體液中的SOD酶活性。2.通過WST-8法測定SOD活性，zui大抑制率可接近100％，不受一些常見干擾因素的干擾。3.廣泛的檢測范圍：3.13- 200U/mL。

測定步驟：

1、 分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 340nm，蒸餾水調零。

2、 樣本測定

（1）工作液的配制：將試劑二全部倒入試劑一瓶中，充分溶解，37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)預熱 10 分鐘；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

（2）在試劑三中加入 500μL 蒸餾水，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

（3）在 1mL 石英比色皿中加入 30μL 樣本、20μL 試劑三和 950μL 工作液，混勻，加入最后一個試劑的同時開始計時，記錄 340nm 處 20s 時的吸光值 A1 和 5min20s 后的吸光值

A2，計算 ΔA=A1-A2。

GAPDH 活性計算

（1）按樣本蛋白濃度計算

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1072×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=1072×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算

單位的定義：每一萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。GAPDH（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500 ×V 樣÷V 樣總) ÷T=2.144×ΔAV 反總：反應體系總體積，1×10-3L；ε：NADH 摩爾消光系數，6.22×103L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.03 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500 萬。

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