?無菌操作?：細胞培養需在無菌環境下進行，使用前需對超凈工作臺進行紫外線照射滅菌，定期清潔培養箱。實驗人員需更換工作服、鞋套，戴口罩、手套。

?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環氧乙烷滅菌或購買已滅菌產品。

?試劑選擇?：所用培養液、血清、緩沖液等試劑應無菌、無污染，使用前需進行無菌檢測。不同細胞對培養液成分要求有差異，應按細胞類型選擇合適培養液。

?培養條件?：多數哺乳動物細胞適宜培養溫度為37℃，偏差應控制在±0.5℃。培養箱應保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量，細胞培養通常需5%CO2以維持培養液pH值穩定。培養箱內濕度應保持在95%左右。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細胞形態、生長狀態與培養液顏色變化。

?定期檢測?：定期對細胞進行支原體、細菌、真菌等污染檢測。

M199 培養基

1950年，Morgan成功研制出具有確定化學成分的細胞培養液，即M-199，主要用于雞胚成纖維細胞培養。此培養液必須輔以血清才能支持長期培養。M-199可用于培養多種種屬來源的細胞，并能培養轉染的細胞。

 運輸和保存

運輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個月；?

注意僅限科研用。

培養體系中的一些組分是對人體健康有害的物質，請不要用暴露的皮膚接觸培養體系的液體和有培養體系的液體殘留的容器內部；這部分有害物質的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

復蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預熱到 37℃；

2) 準備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養基，放入 37℃水浴鍋中預熱；

3) 戴上護目鏡，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復蘇的細胞，盡快轉入 37℃恒溫水浴鍋中

復溫晃動凍存管以提高復溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細胞吸入事先準備的離心管中，混勻后，1000rpm 離心 5min；

5) 準備一個 T-25 培養瓶，寫上細胞名稱、日期，再加入 4ml 培養基；

6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養基重懸細胞后，轉入 T-25 細胞培養中，混勻后轉入

CO2 培養箱中培養靜置。

傳代 （細胞傳代建議一傳二）

1) 當細胞匯合度達到 85%以上時，可進行傳代。

2) 在生物安全柜內，打開培養瓶瓶口，收集瓶內的培養基；

3) 向培養瓶內加入 3ml 無菌的 1×PBS 后，水平放置培養瓶，使PBS 能夠浸潤到培養瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS；

4) 向瓶內加入消化液 1ml，浸潤底面后放入 37℃ CO2培養箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細胞是否變圓飄起，若全部消化下來則直接向培養瓶內加入2ml 含 10%FBS 的培養基中，將懸液吸入 15ml 離心管；

① 準備一個無菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養基；

② 將消化下來的細胞吸入①中的離心管內中和（避免吹打③）；向之前消化的培養瓶中加入 1ml 繼續消化 2min 左右，輕拍培養瓶，95%左右細胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準備兩個新的 T-25 培養瓶，各加入 4ml培養基。

8) 離心完成后，棄上清，用 2ml 培養基重懸離心細胞，將重懸后的細胞轉入 2 個 T-25 培養瓶，每個培養瓶各 1ml；

9) 水平放置培養瓶，震蕩混勻后，將培養瓶置于 37℃，5%CO2培養箱中靜置培養。 

凍存 （細胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細胞沉淀，然后轉入 1.8ml 凍存管中；

8）將凍存管轉入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉入-80℃冰箱中過夜降溫；

9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉入液氮罐中保存。

小鼠鼠痘病毒(MPV)試劑盒 96T/48T

Human gliadin IgA (Gliadin-IgA) ELISA Kit 人麥角蛋白IgA(Gliadin-IgA)試劑盒

HumangelsonELISAKit 人凝膠原蛋白(gelson)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Duckviruseeritis,DEV試劑盒鴨病毒性腸病毒(DEV)試劑盒規格：96T/48T

增強型DAB顯色溶液A液：10毫升B液：90毫升C液：1毫升

MousecyclophilinA,CyPAELISAKit小鼠嗜環蛋白/親環素A(CyPA)試劑盒規格：96T/48T

大鼠胰島素樣生長因子結合蛋白2(IGFBP2)試劑盒 ，英文名： IGFBP2 ELISA Kit

Mouse visfatin / visfatin (visfatin) ELISA Kit 小鼠內脂素/內臟脂肪素(visfatin)試劑盒

MouseVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor1,VEGFR-1ELISAkit 小鼠血管內皮細胞生長因子受體1(VEGFR-1)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanCTX-2ELISAKit人骨退化特異標志物

細胞a-(a-AMYLASE)活性CNPG3比色法定量試劑盒20次

ELISAKitOPN大鼠骨橋素

兔子巨噬細胞性蛋白1α試劑盒   兔子巨噬細胞性蛋白1α試劑盒   規格型號：96T/48T   兔子巨噬細胞性蛋白1α試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產品別名：兔子巨噬細胞性蛋白1α試劑盒、兔子巨噬細胞性蛋白1α 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

兔子抗中性粒細胞顆粒抗體試劑盒   兔子抗中性粒細胞顆粒抗體試劑盒   規格型號：96T/48T   兔子抗中性粒細胞顆粒抗體試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產品別名：兔子抗中性粒細胞顆粒抗體試劑盒、兔子抗中性粒細胞顆粒抗體試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

兔子可溶性細胞間粘附分子1試劑盒   兔子可溶性細胞間粘附分子1試劑盒   規格型號：96T/48T   兔子可溶性細胞間粘附分子1試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產品別名：兔子可溶性細胞間粘附分子1試劑盒、兔子可溶性細胞間粘附分子1 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

兔子可溶性血管細胞粘附分子1試劑盒   兔子可溶性血管細胞粘附分子1試劑盒   規格型號：96T/48T   兔子可溶性血管細胞粘附分子1試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產品別名：兔子可溶性血管細胞粘附分子1試劑盒、兔子可溶性血管細胞粘附分子1 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

腦蛋白絲/蘇激酶29抗體

腫瘤蛋白P73抗體

CD83重組食蟹猴 CD83 蛋白  Protein

MAGE-1 黑色素瘤相關 0.5mgMAGE-1 黑色素瘤相關

IL21重組人 Interleukin-21 / IL-21 蛋白 Protein

GABARAPL2 Protein Human 重組人 GATE-16 / GABARAPL2 蛋白 (His 標簽)

ITK Protein Mouse 重組小鼠 ITK Kinase 蛋白 (aa 351-619, His & GST 標簽)

M199 培養基序列相似家族5成員C(FAM5C)重組蛋白 Recombinant Family With Sequence Similarity 5, Member C (FAM5C)

FGFR2 Protein Human 重組人 FGFR2 / CD332 蛋白

ACP5重組人 ACP5 / TRAP 蛋白 Protein

Spike Protein MERS-CoV 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein (ECD, aa 1-1297, His 標簽)

HA重組甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein