細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：

一、細(xì)胞復(fù)蘇

1.將10ml移液管、移液槍、1ml槍頭、50ml離心管、T25培養(yǎng)瓶、酒精燈、廢液缸等物品放入超凈工作臺(tái)，紫外燈照射30min后再通風(fēng)30min；

2.預(yù)熱培養(yǎng)基；

3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

4.將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出；

5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動(dòng)使其融化；

6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

7.吸取9ml培養(yǎng)基到50ml離心管中；

8.用1ml槍頭吸取解凍的細(xì)胞懸液于離心管中；

9.1000r/min,離心5min；

10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

11.吸棄上清液；

12.吸取1ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使細(xì)胞分布均勻，并做好標(biāo)記；

13.在顯微鏡下觀察復(fù)蘇的細(xì)胞密度及狀態(tài)；

14.將細(xì)胞放回二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

商品屬性：

人原代食管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過長(zhǎng)期測(cè)試，本產(chǎn)品可保持人原代食管平滑肌細(xì)胞最佳的生長(zhǎng)狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含人原代食管平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于人原代食管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

?細(xì)胞復(fù)蘇?：

從液氮罐中取出凍存細(xì)胞，迅速放入37℃水浴中解凍。

解凍后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕輕搖動(dòng)使細(xì)胞均勻分布。

放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞換液?：

吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)的舊培養(yǎng)液。

加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細(xì)胞，以去除懸浮在細(xì)胞表面的碎片，重復(fù)幾次。

加入新的培養(yǎng)基。

?細(xì)胞傳代?：

當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)到80%~90%時(shí)，進(jìn)行傳代。

吸除或倒掉瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加入PBS緩沖液漂洗。

加入消化液，輕輕搖動(dòng)使消化液流遍所有細(xì)胞表面。

將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘，觀察細(xì)胞變化。當(dāng)細(xì)胞間隙增大后，加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化。

吹打細(xì)胞使其成為懸液，轉(zhuǎn)移到離心管中離心。

棄上清，加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基。

做好標(biāo)記，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞凍存?：

選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行凍存。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到離心管中離心，棄上清。

加入適量的凍存液（如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細(xì)胞。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中，標(biāo)記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時(shí)后或過夜轉(zhuǎn)至液氮罐保存。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠羧甲基賴酸(CML)pcr檢測(cè)試劑盒

Human ovalbumin specific IgE (OVA sIgE) ELISA Kit 人卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)試劑盒

HumanIerleukin1βconveingenzyme,ICEELISAKit 人白介素1β轉(zhuǎn)換酶(ICE)pcr檢測(cè)試劑盒分裝

DeerInsulin-likegrowthfactorbindingprotein3,IGFBP-3試劑盒胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細(xì)胞線粒體復(fù)合物III蛋白表達(dá)熒光顯微鏡試劑盒10/20次

MouseEndothelialniicoxidesyhase3,eNOS-3ELISAKit小鼠內(nèi)皮型合成酶3(eNOS-3)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠生長(zhǎng)停滯特異性蛋白6(GAS6)試劑盒 ，英文名： GAS6 ELISA Kit

Mouse vitamin D3 (VD3) ELISA Kit 小鼠3(VD3)試劑盒

RatN-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAGELISAKit 大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)pcr檢測(cè)試劑盒分裝

CLIAKitforHD(MouseHistoneDeacetylase)ELISAKit小鼠組織蛋白去乙酰化酶

細(xì)胞TUNEL顯色法(DAB)測(cè)定試劑盒10/20次

ELISAKitLCA扁豆凝集素

小鼠廋素   英文名稱：   Leptin   英文縮寫：   Leptin

小鼠廋素受體   英文名稱：   Leptin receptor   英文縮寫：   Leptin R

小鼠促黃體生成激素   英文名稱：   leinizing hormone   英文縮寫：   LH

小鼠   英文名稱：   Lysozyme   英文縮寫：   Lysozyme

中心體蛋白192抗體

VAMP1囊泡相關(guān)膜蛋白1抗體

IL11RA重組小鼠 IL11RA / IL11Rα 蛋白 Protein

CD117/c-kit/SCFR 干細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體/細(xì)胞表面分化抗原(抗原 0.5mgCD117/c-kit/SCFR 干細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體/細(xì)胞表面分化抗原(抗原)

FTL重組人 FTL / ferritin, light polypeptide 蛋白 Protein

CIB2 Protein Human 重組人 CIB2 / KIP-2 蛋白

LAYN Protein Rat 重組大鼠 Layilin / LAYN 蛋白

人原代食管平滑肌細(xì)胞專用培養(yǎng)基CD117/c-kit/SCFR 干細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體/細(xì)胞表面分化抗原(抗原 0.5mgCD117/c-kit/SCFR 干細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體/細(xì)胞表面分化抗原(抗原)

CIB2 Protein Human 重組人 CIB2 / KIP-2 蛋白

IL11RA重組小鼠 IL11RA / IL11Rα 蛋白 Protein

LAYN Protein Rat 重組大鼠 Layilin / LAYN 蛋白

FTL重組人 FTL / ferritin, light polypeptide 蛋白 Protein